进击2017!科诺安临床深度交流会•南宁站

“二孩”时代下,孕产妇数量的集中增长、孕产妇年龄的普遍升高以及孕妇家庭想要“确定地”成功生育“完全”健康的宝宝的迫切愿望,给产前遗传学诊断带来了新的压力和挑战。

面对时代的挑战,临床将如何应对?产前遗传学诊断又将迎来怎样的新局面?

6月3日,贝瑞和康“科诺安(CNV-Seq)临床应用深度研讨会”第二站在南宁成功举办。会议有幸邀请到华西第二医院刘洪倩教授、广西自治区人民医院田矛主任、贵州医科大学附属医院余蕾主任、湖南家辉遗传专科医院谭虎博士及广西17家产前诊断及妇产相关医疗机构的50余位专家齐聚一堂,对CNV-Seq的临床应用展开了深度交流与讨论。

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刘洪倩教授在题为“高通量测序分析在染色体畸变产前诊断中的应用”的报告中指出,出生缺陷防控的重点之一是染色体病,近年来高通量测序技术(NGS)发展迅速,无创产前筛查(NIPS)已经能将T21、T18、T13三大最常见的胎儿染色体非整倍体疾病准确检测出来,在这样新的时代背景下随着就医意识的改变,选择介入性产前诊断的孕妇需要更精准和更全面的检测信息,产前诊断的目标应扩展到核型分析所检测不到的染色体亚显微结构异常。

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刘洪倩  教授

同时刘教授指出,传统观点认为孕妇因担心术后流产风险而抗拒介入性产前诊断,NIPS的应用将带来介入性产前诊断量的减少。而根据华西第二医院的经验,当羊膜腔穿刺术后胎儿丢失率仅为0.07%,甚至低于染色体结构异常发生率时,该院的介入性产前诊断量并没有因NIPS的开展而减少,一直呈逐年上升趋势,今年预计将突破20000例,这充分说明,当下制约产前诊断发展的不再是取材手段,而是取材后应用何种诊断技术才是临床面临的挑战。

针对这一挑战,刘教授总结到,传统核型分析技术因其分辨率有限、细胞培养周期长、存在失败风险、检测自动化程度低、质控困难等局限性,已经无法完全适应新时代大量、快速、精准、全面的产前诊断需求;快速产前诊断技术如FISH、QF-PCR、MLPA等对非整倍体有较好的诊断效能,但对CNV无法全面准确检出;染色体微阵列分析(CMA)虽然能检测染色体亚显微结构异常,但其因基因组覆盖不均匀、通量低、成本高等因素不能在产前诊断得到广泛应用;而近年来发展的基于NGS的染色体结构变异检测(CNV-Seq)已成功应用于临床,可一次性准确检测23对染色体的数目及结构异常,包括核型分析所不能检出的5Mb以下的染色体亚显微结构异常。

刘教授分享了其所在产前诊断中心在其本院的NextSeq CN500测序平台上应用CNV-Seq进行产前诊断的情况。2017年2月底至4月中旬,共有856个高龄、唐筛或NIPS高危、软指标高风险以及其他高风险的孕妇选择羊水穿刺后进行CNV-Seq检测,结果统计显示,CNV- Seq与核型分析相比能额外检出17.39%的染色体异常(小于5Mb的致病性CNV),并且所有致病性CNV经CMA验证结果完全一致。CNV-Seq甚至还检测到一例缺失0.14Mb的 Duchenne型肌营养不良症(DMD)的单基因病携带者(4个外显子缺失,经MLPA验证证实)。刘教授还强调,CNV-Seq可以与NIPS在NextSeq CN500平台上合并上机同时开展,通量高、操作简便、质控简单、报告周期短,特别是运行成本较低,受到了越来越多孕妇的青睐。

CNV-Seq在产前诊断的临床效力,在余蕾主任的题为“稳稳的幸福:核型分析 + CNV-Seq的产前诊断模式”的报告中也体现的淋漓尽致。余主任通过详细的案例讲解介绍了其所在中心如何应用CNV-Seq弥补核型分析在新时代产前诊断应用中的不足,成功保障每一份产前诊断报告快速、准确地交给受检孕妇,使孕妇家庭获得稳稳的幸福的同时,也给在重压之下辛勤工作的产前诊断工作者带来“稳稳的幸福”。余主任介绍,在贵医附院近期连续300例“核型分析+CNV-Seq”的产前诊断样本中,242例正常核型及58例异常核型的CNV-Seq检测结果符合率都达到100%,并且通过CNV-Seq对疑难核型报告的辅助分析大大缩短了产前诊断的报告周期,特别是对核型分析认为染色体多态性的验证及伴随着平衡易位容易发生的微小的致病性结构变异的检出,为核型分析提供了很好的补充。

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余蕾  主任

田矛主任则从一名产科临床大夫的角度结合大量实际工作中的典型案例与大家分享了广西自治区人民医院对产前超声异常及其他指征中CNV-Seq的应用经验,指出高通量测序要与产前超声联合运用并与临床随访结合起来。田主任提到,胎儿超声异常是产科在围产期无法回避的问题,但超声软指标和结构异常病例中染色体核型分析异常的仅占10%左右,还有大部分超声异常的胎儿核型分析是正常的。我们是否应该对这些胎儿进行更深入的遗传学检查?田主任谈到,受到NT测量的启发,当NT大于3.5mm时,先心病的风险显著升高,而其主要原因之一是22号染色体上3Mb左右的染色体微缺失。结合国际上对染色体微阵列分析(CMA)的产前应用指南,以及CMA技术在国内实验室开展的技术局限性及高昂的成本,广西区人民医院选择CNV-Seq对有需要的孕妇进行染色体结构异常检测,应用指征包括:①年龄>40岁②既往有妊娠超声结构异常胎儿史③早孕超声软指标异常④NIPS异常⑤中孕期开始:超声结构异常/多个软指标异常⑥FGR⑦羊水、脐带、血流等附属物异常的孕妇。
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田矛  主任

谭虎博士则主要介绍了CNV-Seq在流产胚胎染色体异常检测中的应用。谭博士指出,自然流产发病率高,且诊断困难,有一半以上的患者在排查了数种可能的原因后仍然找不到流产原因,这给患者家庭带来极大的心理压力和经济负担的同时,也对临床诊断带来了更大的挑战。谭博士介绍,基于家辉遗传专科医院的研究应用,CNV-Seq能在流产胚胎中实现50%左右的诊断率。该技术对送检样本的要求很低,对于细胞培养核型分析失败率较高的流产胚胎有很好的检测成功率;其次样本量仅需50ng DNA,这对需要平行或序贯式的进行多项检测以提高诊断率的珍贵样本很有意义。这一点从谭博士分享的多个CNV-Seq流产物检测的案例中便可知晓。
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谭虎  博士

会议的最后,贝瑞和康产品经理任志林博士以“未来已来”为题,对本次深度研讨会进行了总结陈述。任博士表示,时代在发展,技术在进步。正如Mark I. Evans所说,在现有技术的检出能力下,如今的每一个孕妇都相当于以前按年龄划分的38岁高风险,都可以考虑进行产前诊断。随着检测技术的进一步发展,以及临床数据库资源特别是中国人自己的数据库资源的不断积累和共享,未来的遗传病诊断将进入更安全、更精准、更全面的时代,并且这个未来已经通过广大临床专家的努力正向我们稳步走来。

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任志林  博士